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有證據(jù)了!研究揭示『支原體污染』對細胞實驗的影響

更新時間:2023-08-13  |  點擊率:556

支原體污染

細胞實驗是生命科學(xué)研究中重要的工具,它們?yōu)榭茖W(xué)家提供了深入了解細胞行為、分子機制以及疾病發(fā)展的機會。

細胞實驗的可靠性和可重復(fù)性是科學(xué)研究的基石。支原體污染是阻礙實驗結(jié)果準(zhǔn)確和可靠的原因之一。支原體是一類細小的微生物,它們可以感染人類和動物細胞,對細胞實驗的結(jié)果產(chǎn)生嚴(yán)重影響,引發(fā)了廣泛的關(guān)注。


本期內(nèi)容,來講講細胞實驗中,已報道過的支原體危害。


影響細胞脂類代謝

研究人員以不同濃度的肺炎支原體處理人肺癌上皮細胞,不同時間后提取胞膜及表面的鞘脂類,應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸附飛行時間質(zhì)譜一 進行分析應(yīng)用RT-PCR和免疫熒光方法,檢測鞘脂類代謝通路中兩個關(guān)鍵酶的變化。

實驗結(jié)果:

肺炎支原體和細胞大多數(shù)鞘脂類組成成分相同;感染能影響細胞的鞘脂類代謝,包括誘導(dǎo)新種類的神經(jīng)酞胺的生成, 升高或降低某些神經(jīng)酞胺的濃度,在一定濃度和時間點能誘導(dǎo)酸性鞘磷脂酶的聚簇和絲氨酸棕擱酞轉(zhuǎn)移酶的變化。


對黑色素瘤細胞的影響

在研究早期傳代黑色素瘤細胞系中的干細胞樣特性時,研究人員注意到感染了豬鼻支原體的細胞系的實驗組的可重復(fù)性差。

研究人員用支原體感染其他黑色素瘤細胞系.研究發(fā)現(xiàn),支原體感染在培養(yǎng)中會產(chǎn)生多形性效應(yīng),從細胞凋亡到增強的致瘤性和侵襲性,并且會造成相當(dāng)大的資源浪費和實驗結(jié)果解釋的混亂[2]。


誘導(dǎo)細胞產(chǎn)生炎癥因子

在一項研究中,研究人員利用肺炎支原體感染A549細胞。

研究發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn),肺炎支原體能刺激A549細胞分泌TNF-α, 其產(chǎn)生水平與刺激時間具有量的正相關(guān)性;肺炎支原體還能刺激A549細胞分泌IL-8, 其產(chǎn)生水平與刺激時間亦具有量的正相關(guān)性。而被支原體感染的A549細胞分泌TNF-α和IL-8可能與NF-κB的激活有關(guān)。


誘導(dǎo)細胞氧化應(yīng)激

在這項研究中,研究人員利用多巴胺能神經(jīng)元細胞系(BE-M17),使用單細胞凝膠電泳(彗星試驗),來評估支原體感染對基因組不穩(wěn)定性和堿基切除修復(fù)(BER)活性的影響。

結(jié)果表明,與未感染的細胞相比,支原體感染在沒有炎癥反應(yīng)的情況下誘導(dǎo)氧化應(yīng)激,DNA損傷水平(鏈斷裂/堿不穩(wěn)定位點(SB/ALS)和氧化嘌呤)顯著增加。未感染細胞修復(fù)SB/ALS的速度比感染細胞更快。未感染的細胞在24小時內(nèi)就能修復(fù)氧化嘌呤,而感染的細胞在30小時后也不能修復(fù)。

總之,本研究表明,支原體感染不僅會誘導(dǎo)氧化應(yīng)激和DNA損傷,而且還會降低負責(zé)氧化損傷DNA修復(fù)的主要途徑,即BER的效率

[1]郁園園. 肺炎支原體感染干擾人肺癌上皮細胞A549的脂類代謝[D],2008.

[2]Ji Y, Karbaschi M, Cooke MS. Mycoplasma infection of cultured cells induces oxidative stress and attenuates cellular base excision repair activity. Mutat Res Genet Toxicol Environ Mutagen. 2019;845:403054. doi:10.1016/j.mrgentox.2019.05.010

[3]肺炎支原體誘導(dǎo)A549細胞分泌腫瘤壞死因子-α和白細胞介素-8的相關(guān)性[J],2009,30(02):188-190+194.


預(yù)防實驗室中的支原體污染

由于支原體感染細胞,會帶來一系列難以預(yù)測的生理生化反應(yīng),影響實驗結(jié)果,因此,在日常的實驗中,要注意預(yù)防支原體污染的發(fā)生。

除了常規(guī)的實驗室清潔外,建議使用專業(yè)的支原體清除、預(yù)防試劑——德國Minerva Biolabs公司的支原體祛除噴霧劑:Mycoplasma-off™,水槽支原體預(yù)防試劑:Water Shield™。 

Mycoplasma-off™


Mycoplasma-off™特點:

(1)快速有效

Mycoplasma-off™支原體祛除噴霧劑即用型中含有支原體殺除劑Mynox®,可在幾分鐘內(nèi)迅速殺除支原體。   

(2)廣譜抗菌

不僅能清除并預(yù)防支原體,而且能有效祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。

(3)無腐蝕性和致癌性

乙醇作為溶劑,無腐蝕性和致癌性成分。

(4)操作簡便

即用型消毒液,可以快速簡單地保持工作區(qū)的清潔干凈。

Mycoplasma-off™使用方法及步驟:

(1)將Mycoplasma-off™均勻噴于待消毒的潔凈臺或?qū)嶒炘O(shè)備和器材的表面。

(2)等待5-10分鐘。

(3)用干燥紙巾將已噴過Mycoplasma-off™的潔凈臺或?qū)嶒炘O(shè)備和器材的表面搽拭干凈。

(4)將已消毒的潔凈臺通風(fēng)2-3分鐘,或?qū)⒁严镜膶嶒炘O(shè)備和器材置于通風(fēng)處2-3分鐘。

(5)將剩余的Mycoplasma-off™噴霧劑置于陰涼通風(fēng)處保存。

Water Shield™


細胞培養(yǎng)環(huán)境中,培養(yǎng)箱水槽,水浴鍋經(jīng)常會有支原體以及各種細菌、霉菌滋生,稍有不慎或清洗不及時,水槽中的水源即會成為細胞污染的重要來源。

Water Shield™可持續(xù)作用四周,預(yù)防水源中的支原體、細菌、真菌、霉菌、孢子的污染。

Water Shield™特點:

(1)長效。Water Shield™含表面活性劑、季銨鹽和絡(luò)合劑,不易揮發(fā),可持續(xù)作用4周。

(2)安全。不含醛類或疊氮化物,對細胞無毒害。

(3)廣譜。預(yù)防支原體、細菌、真菌、霉菌、孢子污染。

(4)方便。Water Shield™按1:200比例,直接加入水中,使用方便。

(5)不產(chǎn)生水垢。

Water Shield™使用方法及步驟:

(1)Water Shield™和蒸餾水可直接加入培養(yǎng)箱水槽或水浴鍋中。

(2)Water Shield™按1:200比例使用,例如:1000ml蒸餾水+5mlWater Shield™或10L蒸餾水+50mlWater Shield™。

(3)4周左右清洗水槽,換水,重新加入Water Shield™。


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