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細胞培養(yǎng)之~繁殖

更新時間:2022-05-11  |  點擊率:635

培養(yǎng)細胞的生存環(huán)境是培養(yǎng)瓶、器皿或其他容器,生存空間及營養(yǎng)是有限的。當細胞增殖到一定密度后,分離出一部分細胞和更新營養(yǎng)液,使細胞更好地生存,這一過程稱之為“傳代"(passage或subculture)。

值得注意的是:每次傳代細胞在生長和增殖方面受到一定的影響。

生命期

指細胞在培養(yǎng)過程中持續(xù)增殖和生長的時間。一般根據(jù)細胞種類、性狀和原供體的年齡的情況而定。

如:二倍體成纖維細胞,在不凍存和反復(fù)傳代條件下可傳30~50代,相當于150~300個細胞增殖周期,能維持一年左右的生命,細胞便開始凋亡(apoptosis)。 細胞在生存過程中經(jīng)歷以下三個階段

1.原代培養(yǎng)期(primary culture)

細胞培養(yǎng)

組織到第一次傳代時間大約為1~4周

特點:

細胞移動活躍,但分裂不旺盛,多呈二倍體核型。

原代與體內(nèi)原組織形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動基本相似。

各細胞的遺傳性狀互不相關(guān),細胞相互依存性強,如果把這種稀釋分散成單細胞,在軟瓊脂培養(yǎng)基中進行培養(yǎng),細胞克隆的形成率(cloning efficiency)下降,表明細胞獨立生存性差。

2.傳代期(passage)

初代培養(yǎng)細胞一經(jīng)傳代便稱之為細胞系(cell line)

特點:

細胞增殖旺盛,并維持二倍體核型,也叫二倍體細胞系(diploid cell line)為了保存二倍體細胞性質(zhì),細胞應(yīng)在初代或傳代早期凍存為好。

一般細胞在10代以內(nèi)凍存。

凍存配方:

向培養(yǎng)液加入保護劑二甲基亞砜(DMSO)或甘油,封入安瓶中。

存于在液氮中溫度可達到-196℃,可長期儲存。如解凍后細胞復(fù)蘇,仍能繼續(xù)增殖生長,細胞性狀不受影響,成為保存細胞最主要的手段。

3.衰退期

特點:細胞仍生存 增殖減慢 不增殖 輪廓增強 衰退凋亡

注意:細胞在三期中的任何一期(一般發(fā)生在傳代后期或衰退期)在某些因素影響下,如血清質(zhì)量不佳、病毒污染、溫度和pH不穩(wěn)等,細胞可能發(fā)生自發(fā)轉(zhuǎn)化(spontaneous transformation);

細胞可能獲得永生性(immortality) 或稱為惡性性(malignancy)。細胞獲得持久性的增殖能力,這樣的細胞群體稱為連續(xù)細胞系(continuous cell line)。而細胞獲得不死性后,細胞核型大多變成異倍體(heteroploid)接觸抑制消失。

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