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介紹排除雜細(xì)胞的方法

更新時(shí)間:2022-04-26  |  點(diǎn)擊率:599

介紹排除雜細(xì)胞的方法:

1、使用含肝素的培養(yǎng)液:

在培養(yǎng)液中加入90 U/ml的肝素,可使內(nèi)皮細(xì)胞純度提高;

2、在相差顯微鏡下刮去明顯的雜細(xì)胞群。

表皮細(xì)胞:

來源:小兒包皮、全皮細(xì)胞不易與成纖維細(xì)胞混合生長區(qū)分。

以膠原為底物;

溫度低易生長;

在培養(yǎng)基中加入氫化ke的松(10g/ml);或 10-6 異丙腎上腺素;或10-10霍亂毒素;或10ng/ml表皮生長因子;

上述任何一種物質(zhì)細(xì)胞易生長。

巨噬細(xì)胞:

特點(diǎn):保持原有形態(tài)和吞噬物功能,易于分離不易建立傳代細(xì)胞系,生存2~3周

無刺激:小鼠/只 2 ~ 3?106個(gè)/只

刺激物:牛血清、礦物油、硫羥乙酸鹽,刺激1ml/只 20 ~30 ?106 個(gè)/只,但刺激物難消化掉,殘留在細(xì)胞內(nèi),干擾細(xì)胞生長。

用40ugPHA注射腹腔中 6 ~ 18 ?106 個(gè)/只,效果好。

乳腺細(xì)胞:

來源:腺上皮細(xì)胞

消化:膠原酶

注意:接種底物加膠原

使用1640培養(yǎng)基加10%小牛血清,補(bǔ)加氫化ke的松、胰島素;乳腺細(xì)胞易生長。

心肌細(xì)胞:

來源:心室肌,1~3d齡, 剪成0 .5~1mm3大小組織塊,放入錐形瓶中。消化:加入 (0. 8g/L)膠原酶Ⅰ,在37℃水浴,磁力攪拌器轉(zhuǎn)速為100r/min,消化10分鐘。

消化:膠原酶Ⅰ, 0.25%胰蛋白酶

易于生長:50mg/L多聚賴氨酸涂在培養(yǎng)瓶內(nèi).

注意:分次消化可減輕膠原酶或胰蛋白酶對(duì)單細(xì)胞的破壞作用。消化溫度在35~37℃左右,過高溫度會(huì)增加膠原酶或胰蛋白酶的毒性,溫度過低會(huì)降低膠原酶或胰蛋白酶的活性。

心肌細(xì)胞質(zhì)量評(píng)價(jià):

純度鑒定:鏡下觀察、計(jì)數(shù)純化后的細(xì)胞;

觀察:心肌細(xì)胞成圓型 成纖維細(xì)胞成梭形,

計(jì)算:心肌細(xì)胞純度=心肌細(xì)胞數(shù)/(心肌細(xì)胞數(shù)+成纖維細(xì)胞數(shù))×100%。

神經(jīng)細(xì)胞:

消化:0.1%胰蛋白酶

10-5 M 阿糖胞苷去除膠質(zhì)細(xì)胞。

成纖維細(xì)胞

建立細(xì)胞株系的常用

來源:以人胚皮膚、幼兒包皮為好

消化:胰蛋白酶

注意:

1.從細(xì)胞生長到第一次傳代需1~2個(gè)月左右時(shí)間

2.以后傳代7~10天傳1次,3~4天/次(換液〕

3.無菌操作減少霉菌的污染;二性霉素抑制霉菌生長,但也能抑制細(xì)胞生長

4.如組織塊,絕對(duì)避免翻動(dòng)和振動(dòng),否則組織塊不易附著或附著后脫落.


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