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如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?

更新時(shí)間:2022-01-14  |  點(diǎn)擊率:616

胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過(guò)心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。

組份與比例不同:兩者所含的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同,用途與用法不同:某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長(zhǎng),而有些細(xì)胞只需小牛血清即可,使用濃度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%。


科研實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞的體外培養(yǎng)一直是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞要養(yǎng)好,就要用好血清,如Ausbian®特級(jí)胎牛血清,它適合各種細(xì)胞培養(yǎng),尤其適合難養(yǎng)細(xì)胞,如:干細(xì)胞、肝細(xì)胞,神經(jīng)細(xì)胞,原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)染細(xì)胞等。


血清沉淀是什么?
血清中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀,其成分有多種類型,產(chǎn)生的原因有很多,主要有纖維蛋白、磷酸鈣還有一些其它成分。

1. 纖維蛋白(Fibrin)
血清中肉眼可見(jiàn)的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產(chǎn)過(guò)程中,血清采集、過(guò)濾(3 次 0.1 μm過(guò)濾)和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時(shí)血清中纖維蛋白原(Fibrinogen)處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會(huì)發(fā)生凝集,形成肉眼可見(jiàn)的沉淀。

2. 磷酸鈣(Calcium Phosphate)
這是一種常見(jiàn)的沉淀成分,通常會(huì)造成血清出現(xiàn)云霧狀渾濁。當(dāng)產(chǎn)品在 37℃保存時(shí),這種現(xiàn)象尤其明顯,在倒置顯微鏡下可觀察到小黑點(diǎn)的存在。這些小黑點(diǎn)在布朗運(yùn)動(dòng)的作用下四處游動(dòng),常被誤認(rèn)為是微生物污染。
3. 其他成分(Other) 
血清中的其他成分也會(huì)形成沉淀,例如膽固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等

解凍血清時(shí) ,應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱,并經(jīng)常搖勻使之溶解,然后至室溫放置使之升溫,絕對(duì)不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中,如放在37℃解凍,顏色加深,粘稠度也會(huì)增加,血清在解凍和熱滅活后,應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存,避免反復(fù)凍融。

按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:

(1)解凍血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。

(2) 血清分裝凍存時(shí),須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。

(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

(4) 勿將血清置于37℃太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。

(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無(wú)須做此步驟。

(6) 若必須做血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高,時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。


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